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Il campione mostra un eccellente contrasto quando la luce diffratta e la luce diretta (non deviata) sono sfasate
di 1/2 di lunghezza d’onda. Il metodo di Zernike consiste nello sfasare ulteriormente anche la luce diretta di 1/4
di lunghezza d’onda, in modo che la differenza tra luce diffratta e diretta sia proprio 1/2 di lunghezza d’onda.
Come risultato, le due componenti di luce producono un’interferenza distruttiva sul piano immagine dell’oculare.
Questa procedura produce un’immagine con dettagli più scuri su un fondo più chiaro. Questa tipologia è detta
contrasto di fase positivo (figura 2).
Una seconda variante consiste nello sfasare la luce diretta sempre di 1/4 di lunghezza d’onda ma in modo che
arrivi in fase sul piano immagine con la luce diffratta, causando quindi interferenza costruttiva. Questa procedura
produce un’immagine con dettagli più chiari su un fondo più scuro. Questa tipologia è detta contrasto di fase
negativo (figura 3).
Gli accessori richiesti per il funzionamento in contrasto di fase sono un condensatore da porre sotto il tavo- lino,
equipaggiato con diaframmi ad anello, e un set di obiettivi per contrasto di fase, ciascuno dotato di una lamina
di fase ad anello. La dotazione include inoltre un filtro verde (per incrementare la risoluzione) e un telescopio di
centratura (per centrare gli anelli).
Le tecniche di microscopia di fase sono particolarmente utili con campioni sottili e distribuiti sul campo visivo. Vi
sono alcune limitazioni in tale tecnica:
•
Le immagini di fase sono solitamente affette da aloni intorno ai bordi dei dettagli. Questi aloni sono artefatti
ottici, che possono oscurare talvolta le frontiere tra dettagli adiacenti.
•
Gli anelli di fase limitano l’apertura numerica del sistema ottico, riducendo (comunque in minimo grado) la
risoluzione.
•
Il contrasto di fase non funziona al meglio con campioni spessi, in quanto le variazioni di fase av- vengono
in zone poco al di sopra o al di sotto del piano di messa a fuoco.
•
Le immagini di fase appaiono grigie quando viene usata una luce bianca, e verdi quando viene inserito il
filtro verde.
Figura 2
Figura 3
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